ELISA檢測試劑盒實驗原理：
 

　　本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中人血管內皮生長因子(VEGF)水平。用純化的人血管內皮生長因子(VEGF)抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入血管內皮生長因子(VEGF)，再與HRP標記的血管內皮細胞生長因子(VEGF)抗體結合，形成抗體-抗原-酶標抗體復合物，經過*洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的血管內皮生長因子(VEGF)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值)，通過標準曲線計算樣品中人血管內皮生長因子(VEGF)濃度。
 

　　ELISA檢測試劑盒技術原理：
 

　　1、抗原或抗體的固相化及抗原或抗體的酶標記。
 

　　2、結合在固相載體表面的抗原或抗體仍保持其免疫學活性。
 

　　3、酶標記的抗原或抗體既保留其免疫學活性，又保留酶的活性。
 

　　4、受檢標本與固相載體表面的抗原或抗體起反應。再加入酶標記的抗原或抗體，也通過反應而結合在固相載體上。
 

　　5、此時固相上的酶量與標本中受檢物質的量呈一定的比例。
 

　　6、加入酶反應的底物后，底物被酶催化成為有色產物，產物的量與標本中受檢物質的量直接相關，故可根據呈色的深淺進行定性或定量分析。測定方法具有很高的敏感度(pg-ng/ml水平)，并且重復性好。以免疫學反應為基礎，將抗原、抗體的特異性反應與酶對底物的高效催化作用相結合起來的一種敏感性很高的試驗技術
 

　　ELISA檢測試劑盒樣本處理及要求：
 

　　1. 血清：室溫血液自然凝固10-20分鐘，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如出現沉淀，應再次離心。
 

　　2. 血漿：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑，混合10-20分鐘后，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應該再次離心。
 

　　3. 尿液：用無菌管收集，離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清，保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。胸腹水、腦脊液參照實行。
 

　　4. 細胞培養上清：檢測分泌性的成份時，用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。檢測細胞內的成份時，用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液，細胞濃度達到100萬/ml左右。通過反復凍融，以使細胞破壞并放出細胞內成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成，應再次離心。
 

　　5. 組織標本：切割標本后，稱取重量。加入一定量的PBS，PH7.4。用液氮迅速冷凍保存備用。標本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4)，用手工或勻漿器將標本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉/分)。仔細收集上清。分裝后一份待檢測，其余冷凍備用。
 

　　6. 標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行，提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應避免反復凍融.
 

　　7. 不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。
 

　　ELISA檢測試劑盒注意事項：
 

　　1、試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應裝入密封袋中保存。
 

　　2、濃洗滌液可能會有結晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結果。
 

　　3、各步加樣均應使用加樣器，并經常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間*控制在5分鐘內，如標本數量多，推薦使用排槍加樣。
 

　　4、請每次測定的同時做標準曲線，*做復孔。如標本中待測物質含量過高(樣本OD值大于標準品孔的OD值)，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(n倍)后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(×n×5)。
 

　　5、封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。
 

　　6、底物請避光保存。
 

　　7、嚴格按照說明書的操作進行，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
 

　　8、所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。
 

　　9、本試劑不同批號組分不得混用。
 

　　10、 如與英文說明書有異，以英文說明書為準。