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                  以下這些就是PCR檢測試劑盒的實驗目的和原理
                  瀏覽次數:803發布日期:2020-07-17
                    PCR檢測試劑盒原理是由一對引物介導,能在動植物體外對特定基因(DNA)片斷進行快速酶促擴增,經過n個熱循環擴增,擴增產物中所含特定基因數是原始模板數的(1+E)n(0<E<1,擴增效率=倍,使得檢測擴增產物中的特定基因成為可能。
                   
                    技術特點:
                    1、PCR試劑盒準確可靠,臨床雙盲對照試驗>1000例,結果與金標準測序法比對,結果*性大于99%。
                    2、高靈敏:可檢測低至10ng的人基因組DNA。
                    3、快速:整個檢測流程只需3小時。
                    4、簡便:試劑盒提供預混好的試劑,使體系配置操作簡便。
                    5、防污染
                    6、產品僅用于科研高特異性:雙重特異性組成,保證檢測結果的特異性和準確性引物與DNA互補鏈結合必需*配對,才能延伸。探針特異性與所檢測基因的PCR產物配對,在延伸中產生熒光。
                   
                    PCR檢測試劑盒的實驗目的:
                    1、掌握PCR法擴增目的基因片段的基本原理與方法;
                    2、通過PCR驗證目的基因片段是否插入質粒中;
                    3、充分理解本學期三次分子實驗的原理、聯系與意義。
                   
                    實驗原理:
                    分子生物學實驗技術基本原理:
                    PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶鏈式反應,是指在DNA聚合酶催化下,以母鏈DNA為模板,以特定引物為延伸起點,通過變性、退火、延伸等步驟,體外復制出與母鏈模板DNA互補的子鏈DNA的過程。是一項DNA體外合成放大技術,能快速特異地在體外擴增一定長度的DNA片段??捎糜诨蚍蛛x克隆,序列分析,基因表達調控,基因多態性研究等許多方面。
                    在高溫(94℃)下,待擴增的靶DNA雙鏈受熱變性成為兩條單鏈DNA模板;而后在低溫(37~55℃)情況下,兩條人工合成的寡核苷酸引物與互補的單鏈DNA模板結合,形成部分雙鏈;在普通Taq酶的Zui適溫度(72℃)下,以引物3’端為合成的起點,以d NTP為原料,沿模板以5’→3’方向延伸,合成DNA新鏈。這樣,每一雙鏈的DNA模板,經過一次解鏈、退火、延伸三個步驟的熱循環后就成了兩條雙鏈DNA分子。如此反復進行,每一次循環所產生的DNA均能成為下一次循環的模板,每一次循環都使兩條人工合成的引物間的DNA特異區拷貝數擴增一倍,PCR產物得以2n的形式迅速擴增,經過25~30個循環后,理論上可使基因擴增10 倍以上。
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